荧光显微镜检基本技术,动物细胞涂片检测仪器 荧光显微镜检术用于两种基本的技术,即直接FA法和间接FA法。直接法是将待检的材料涂片固定,用含有特异抗体的结合球蛋白试剂浸渍。将浸满试剂的涂片放在温室内在37℃培育30—60min。然后将涂片洗两次,第工一次用缓冲生理盐水洗5一lOmin。再用自来水洗5一lOmin,将没有结合的球蛋白全部洗去。滴一滴缓冲甘油于涂片上,加盖无荧光的盖玻片。涂片即可用荧光显微镜检查。 间接法是将涂片先用未标记的抗血清处理,这称为初次结合作用。操作方式与直接法完全一样。涂片经培育与洗涤之后,加初次反应所用同源动物的血清球蛋白用荧光素标记的抗球蛋白抗体。涂片再培育和洗涤,荧光素显示抗原与初次反应使用未标记特异抗体之间反应情况。如抗原与特异抗体未发生结合,则随后加的荧光素标记的抗球蛋白,因没有和特异抗体的球蛋白结合而不产生荧光。 间接法的优点是需用标记抗血清的量较少。如果所有诊断用抗血清都是用单独一种动物——例如家兔生产的,则仅需要荧光素标记的抗兔球蛋白抗体。这种血清是将兔球蛋白注射另一种动物制备的。 许多标记的抗血清如听装的抗兔球蛋白抗体和未标记的特异抗血清都已有商品出售,鉴于生产标记抗血清比较复杂,而且花费时间,可以购买成品使用。
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