荧光显微镜与普通透射光吸收研究用显微镜的区别荧光显微镜技术:光学系统 发射光的波长要长于激发光的波长,是荧光显微镜光学系统的基础这种显微镜与普通透射光吸收研究用的显微镜的区别是有两个滤片。一个初级(激发)滤片置于光源和标本之间。这个滤片与所用光源组合在一起,提供一个相当波段的光,这光的波长与被研究的荧光色素的激发波峰相适应。另一个滤片即第二滤片或屏蔽滤片,它只是为了防止激发波长光进入观察者的眼,置于物镜和眼之间。在所使用的激发光范围内,其透光度应该尽可能低,而在荧光色素发射光谱区域内,其透光度应尽可能荧光染色术(fluorochromy) 用于染色的荧光染料称为荧光色素以区别子那些专用予透射光观察的透光色素(diachrome)。许多染料既可用为透光色素又可用为荧光色素。例如刚果红、伊红、硷性品红(对玫苯胺)。大多数黄、橙和红色染料实际上具有荧光,就这些染料而论,荧光显微镜术只是显示染料的另外一种方法,它的应用不会改变染色的特性。使用强荧光料,由于较低浓度的染料便可被观察到,因而增加了染色反应的灵敏度。然而一个标本染色很深的区域,由于浓缩熄灭,可以只呈现微弱的荧光,除非使用落射照明。由于这个原因,通常用于荧光染色的染液,比透光染色要稀得多。一个典型的荧光色素染液,其浓度是1:10,000,有时使用更稀的溶液。 用荧光显微镜术检查一个染色反应的结果,可有两个特殊的优点5首先扩大了可用染料的范围,包括那些有荧光,但是在可见区域无色,或只是浅染的染料。这类荧光色素的代表是硫黄T和BA0。荧光显微镜术第二个优点是,这种方法较通常的吸收显微镜术,能显示更少两的燃料
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