用荧光显微镜或工业相机或荧光分光度计检测荧光
免疫荧光试验
大体上说,免疫荧光(IF)分析和ELISA很相似。在免疫荧光法下,
荧光物质标记的检测抗体(抗菌体抗原或抗鞭毛抗原)在同抗原结合成免
疫复合物后会发射荧光,,通过在载玻片或96孔聚苯乙烯微孔板上,利
用荧光显微镜或工业相机或荧光分光度计检测荧光。采用的荧光标记物
有罗丹明B、异氰酸荧光素以及异硫氰酸荧光素。荧光抗体技术通过两
种基本方法进行:在直接法中,抗原直接与荧光标记的特异性抗体进行
反应;在问接法中,一抗不用荧光标记,但是具有种属特异性的二抗一
k偶联荧光素分子。在问接法中,荧光标记的抗体可以检测一抗与抗原
形成的免疫复合物的存在。这样,间接法消除了必须为每一种待检微生
物制作荧光标记抗体的麻烦。
侧流免疫层析法
侧流免疫层析分析(试纸条分析)是一种夹心分析技术,与ELlSA反
应发生在微量滴定板的小孔中不同,侧流免疫层析法是在膜上进行的。
首先,将捕获抗体同定于膜(预先划定)的一个区域上,用胶体金或乳胶
颗粒预先标记的检测抗体也包埋在硝酸纤维素膜试纸条上;将含有特异
性抗原(微生物)的样品加到样品孔中,并与试纸条上检测抗体相结合,
该免疫复合物依靠毛细虹吸作用向多孔膜的另一端迁移,在试纸条上有
两条捕获带,一条特异性捕获病原菌,另一条特异性捕获没有与抗原结
合的游离抗体(对照线)。如果膜上只有一条捕获带显色(对照线),意味
着这是一个阴性样品;如果两条带或线都显色,说明结果呈阳性。侧流
分析技术在5~lOmin内可以得到结果,简便易行,经济节约,适用于初
筛试验。
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